壹、前期(qi)準備(bei)與(yu)空(kong)消
1、設(she)備(bei)檢查：確認罐(guan)體(ti)、管(guan)路(lu)(空(kong)氣(qi)/蒸(zheng)汽(qi)/冷(leng)卻水/排汙(wu))、閥(fa)門(men)密(mi)封(feng)性及電源連(lian)接正(zheng)常，攪(jiao)拌(ban)系統(tong)無異常。
2、空(kong)罐(guan)滅(mie)菌(空(kong)消)：通(tong)入飽和(he)蒸(zheng)汽(qi)(121°C)對罐(guan)體(ti)及管路(lu)滅(mie)菌20分鐘(zhong)，結束後(hou)通(tong)無(wu)菌空(kong)氣(qi)保壓(0.15MPa)，防(fang)止(zhi)汙(wu)染。
3、培養基添加：將滅(mie)菌後的(de)發(fa)酵培(pei)養基加入罐(guan)內，定容至(zhi)目(mu)標(biao)體(ti)積(ji)(如(ru)50L)。
二(er)、實(shi)消(xiao)與(yu)參數(shu)設置(zhi)
1、實(shi)罐(guan)滅(mie)菌(實(shi)消(xiao))：再次通蒸(zheng)汽(qi)(121°C，20分鐘(zhong))徹底(di)滅(mie)菌培養基，結束後(hou)維持無(wu)菌環(huan)境(jing)保壓。
2、參數(shu)校準：校正(zheng)pH電(dian)極(ji)和(he)溶(rong)氧(yang)電(dian)極(ji)(DO)，滿(man)刻(ke)度(du)校準溶(rong)氧(yang)值至(zhi)100%。設(she)定溫度、攪(jiao)拌(ban)轉速(su)範(fan)圍(wei)(如(ru)200-800r/min)、pH目(mu)標(biao)值(如(ru)7.0)及補料(liao)聯(lian)動參數(shu)。
三、接種(zhong)操作(zuo)
1、無(wu)菌環(huan)境(jing)控制：關閉門(men)窗及通風(feng)設(she)備(bei)，減少空(kong)氣(qi)流動(dong)。操(cao)作(zuo)人員佩戴無(wu)菌手套(tao)，用酒(jiu)精(jing)棉(mian)擦拭接種(zhong)口(kou)。
2、火焰(yan)圈接種(zhong)：點(dian)燃火焰(yan)圈保護接種(zhong)口(kou)，在(zai)火焰(yan)掩護下拔(ba)除(chu)護套(tao)，通過(guo)壓差法(罐(guan)壓0.15MPa→0.05MPa波(bo)動)將(jiang)種(zhong)子液(ye)快(kuai)速(su)接入罐(guan)內，立即密封(feng)。
四(si)、發(fa)酵過(guo)程控制
1、環(huan)境(jing)維持：保持恒(heng)溫(如37°C)、穩(wen)定(ding)攪拌(根據菌種(zhong)需(xu)求(qiu))、通(tong)氣(qi)量(如1VVM)，自動補加(jia)酸(suan)堿(jian)/消泡(pao)劑(ji)。
2、監測與記(ji)錄(lu)：每(mei)小(xiao)時(shi)記(ji)錄(lu)pH、DO、溫度、罐(guan)壓；定(ding)期(qi)取(qu)樣(yang)檢測菌體(ti)濃(nong)度(du)及雜質；觀察(cha)泡沫(mo)情(qing)況(kuang)，及時(shi)添加消泡劑(ji)。
五(wu)、結束與(yu)清(qing)洗
1、放料(liao)：發(fa)酵完(wan)成後(hou)通知下遊(you)工序(xu)，蒸(zheng)汽(qi)吹洗管道(dao)後(hou)開啟(qi)出料(liao)閥(fa)排出(chu)發(fa)酵液(ye)。
2、罐(guan)體(ti)清(qing)洗：高壓水槍沖(chong)洗罐(guan)壁，頑固(gu)殘(can)留用10%堿(jian)液90°C煮(zhu)洗30分鐘(zhong)；排汙(wu)後(hou)通風(feng)幹(gan)燥(zao)。
3、電(dian)極(ji)保養：pH電極(ji)用(yong)3mol/L KCl溶(rong)液(ye)浸泡(pao)，DO電極(ji)通(tong)電(dian)維護。
4、檢修試(shi)漏(lou)：罐(guan)體(ti)保壓0.15MPa，用(yong)肥(fei)皂(zao)水檢測閥門(men)/法蘭(lan)密封(feng)性，更換(huan)損(sun)壞(huai)墊(dian)片。
關鍵註(zhu)意(yi)事項：全程嚴格無(wu)菌操作(zuo)，避免(mian)雜(za)菌汙(wu)染；電極(ji)校準直接影(ying)響(xiang)工藝精度；火焰(yan)圈接種(zhong)需(xu)快(kuai)速(su)精(jing)準，防(fang)止(zhi)罐(guan)壓歸零(ling)。
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